大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exonucleaseⅢ）是从带3’-OH末端的双链DNA，按3’→5’方向切除5’单核苷酸：
大肠杆菌核酸外切酶Ⅶ则是从单链DNA的3’端和5’端切除寡核苷酸（两种形式）：
（1）（2）
前一种酶需要镁离子作辅助因子才有活性；后一种酶则不需镁离子，因此即使在有螯合剂EDTA的情况下也有活性。另一种从噬菌体λ感染的大肠杆菌中提取的λ核酸外切酶是从带有5’磷酸末端的双链DNA上，逐个切除5’单核苷酸，在反应时需要镁离子：
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